物理性能
各液体组分澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋
应真空包装，无破损漏气。
用途
用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中犬白介素1β(IL-1b)的浓度。
实验原理
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗犬白介素1β(IL-1b)抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入犬白介素1β(IL-1b)校准品和待测样本，再加入生物素标记抗体，经过温育与充分洗涤后，再加入HRP偶联的亲和素，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-生物素标记抗体-亲和素酶的夹心复合物。加TMB显色液，产生蓝色产物，在终止液作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中犬白介素1β(IL-1b)的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中犬白介素1β(IL-1b)的浓度。
特异性
本试剂盒识别天然犬白介素1β(IL-1b)，与结构类似物无交叉。
试验所需自备试验器材
1、标准规格酶标仪。
2、自动洗板机。
3、振荡器。
4、系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。
操作程序
建议老师先做预实验摸索样本最佳稀释倍数，然后再做正式实验。
所有试剂和组分都先恢复到室温，校准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置校准品孔、样本稀释液孔、空白孔和样本孔，校准品孔各加不同浓度的校准品50μL，样本稀释液孔加样本稀释液50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本50μL。除空白孔外，每孔加入生物素抗体100uL，用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育60min。
4、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
5、除空白孔外，每孔加入HRP标记亲和素100uL，用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育20min。
6、重复步骤4。
7、所有孔中加入TMB显色液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育15min。
8、所有孔加入终止液50μL，在450nm波长酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。
注意事项
1、本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
2、试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
3、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
4、洗板不正确可能导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
5、消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。
6、底物显色液应呈无色或很浅的颜色。
7、避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
8、在储存和温育时避免强光直接照射。
9、平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
10、任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
11、检测使用的酶标仪需要安装能检测 450±10nm 波长的滤光片，光密度范围在0-3.5 之间。建议使用时提前 15 分钟预热。
12、请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。
13、试验中所用的 EP 管和吸头均为一次性使用，严禁混用。
14、请勿使用过期的试剂。
问题分析
①问题描述：阴阳性对照结果不稳定
可能原因及相应对策：
1.吸液或加液不准——检查移液器及吸头
2.平衡时间太短——保证充足的平衡时间
3.洗涤不完全——保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量
②问题描述：显色很弱或无色
可能原因及相应对策：
1.孵育时间太短——保证充足的孵育时间
2.实验温度不正确——使用推荐的实验温度
3.试剂体积不够或漏加/稀释不正确——检查吸液及加液过程，保证所有试剂按顺序足量添加
4.酶标记物失活或底物失效——混合酶结合物和底物，通过迅速显色来检查判断
③问题描述：读数数值低
可能原因及相应对策：
1.酶标仪设置不正确——在酶标仪上检查波长及滤光片设置/提前打开酶标仪预热
④问题描述：变异系数大
可能原因及相应对策：
1.加液不正确——检查加液情况
⑤问题描述：背景值高
可能原因及相应对策：
1.检测抗体的工作浓度过高——使用推荐的稀释倍数
2.酶标板洗涤不完全——保证每步清洗完全；如果用自动洗板机，请检查所有的出口是否有堵塞；是否使用试剂盒配备的洗涤液
3.洗液有污染——配制新的洗液
⑥问题描述：灵敏度低
可能原因及相应对策：
1.ELISA试剂盒保存不当——按说明书要求保存相关试剂
2.读数前未终止——OD读数前应在每孔中加入终止液
声明
1、限于现有条件及科学技术水平，尚不能对所有原料进行全面的鉴定分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。
2、本试剂盒在研发过程中去除/降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素，并非所有可能影响的因素均已去除。
3、最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境等因素密切相关，本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本可能的使用量，预留充足的样本。
4、为了达到好的实验结果，请只使用本公司试剂盒内提供的试剂，不要混用其他制造商的产品，严格按照说明书操作。
5、由于操作过程中试剂制备以及酶标仪参数设置不正确，可能导致结果异常，实验前请仔细阅读说明书并调整好仪器。
6、即使是相同人员操作也可能在两次独立实验中得到不同的结果，为保证结果的重现性，需要控制实验过程中每一步的操作。
7、试剂盒发货前会经过严格的质检，然而，因为运输条件、实验设备差异等等因素影响，用户检测结果可能跟出厂数据不一致。
8、本试剂盒未与其他厂家同类试剂盒或不同方法检测同一目的物的产品进行对比，所以不排除检测结果不一致的情况。
9、试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
