人源化小鼠是指将人的细胞、组织和器官移植给小鼠。该技术为人类生物学和病理学提供了更精准的模型，也为小分子药物疗法、抗体治疗、基因治疗提供了更精准的测试模型。

一．造模方法

（1）AGT质粒构建

获取人类AGT基因的DNA序列，构建表达载体及纯化。表达载体通常包括AGT基因的启动子、选择标记基因（如抗生素抗性基因）和其他必要的调控元件。

（2）转基因小鼠的制备

进行小鼠胚胎干细胞ES的培养；通过电穿孔、病毒载体等方法将含有人AGT基因的质粒转染到ES细胞中，同时转染 Cas9：sgRNA 可以产生特定的双链断裂，从而提高同源重组效率；之后，运用抗性基因选择可以筛选包含人AGT的ES细胞。

（3）小鼠模型的制备

将携带人AGT基因的ES细胞注射到小鼠的早期胚胎中，通常是在小鼠的受精卵阶段；将这些重组的胚胎植入母鼠（C57BL/6JGpt小鼠）的子宫中，以产生转基因小鼠。

（4）筛选和鉴定转基因小鼠

通过PCR和Southern分析AGT mRNA水平，或ELISA分析AGT蛋白水平，来鉴定哪些小鼠成功携带了人类AGT基因。

（5）繁殖和维护模型：

成功的转基因小鼠将被用于繁殖，以获得后代，确保AGT基因的稳定传递。

二．AGT背景介绍

血管紧张素原（Angiotensinogen，AGT）是肾素-血管紧张素系统RAS的独特前体，可通过酶途径连续裂解产生所有血管紧张素肽产物。RAS系统是由一系列肽类激素及相应酶组成的重要的体液调节系统，参与调节动脉血压和血浆钠浓度，调节和维持人体血压、水、电解质的平衡，维持人体内环境的相对稳定。它不仅在高血压、肾脏疾病、心肌肥厚等疾病中发挥重要作用，而且几乎在所有心、脑血管疾病中都具有重要病理作用。研究表明，过度激活的肾素-血管紧张素-醛固酮系统是高血压形成的原因之一。因而，构建了AGT人源化小鼠模型可应用于高血压相关机制研究和靶向AGT降压药物药效评价及药物筛选。

三．上市药物

AGT作为RAS系统中所有血管紧张素肽的前体，可反映整个RAS的状态。AGT与高血压和动脉粥样硬化的分子机制和临床相关性方面取得的重要进展，使其成为治疗心血管疾病的靶点。Zilebesiran是由Alnylam公司开发的，一种针对AGT的皮下注射RNAi疗法，目前处于临床II期开发阶段，用于治疗高血压，适用于高需求人群。Zilebesiran 可抑制 AGT 在肝脏中的合成，从而导致 AGT 蛋白的减少，最终导致血管收缩素 (Ang) II 的减少。Zilebesiran采用了的增强稳定化学强化（ESC+）GalNAc-共轭物技术，通过皮下注射，具有更高的选择性和更广的治疗指数。2023年7月24日，Alnylam宣布与罗氏公司达成战略协议，共同开发和商业化zilebesiran。

四. 实验数据与数据分析

　　我公司利用快速精准的抗体配对筛选技术，成功研制的AGT ELISA试剂盒已应用于AGT人源化小鼠的检测。研发数据如下：

图 B6J-hAGT小鼠hAGT表达检测

与对照组小鼠相比，B6J-hAGT^+/-模型小鼠能显著性表达人AGT蛋白；且对不同B6J-hAGT^+/-小鼠血清样本进行梯度稀释后，人AGT蛋白OD值线性良好