用途
用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中人尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的浓度。
检验原理
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)校准品和待测样本，再加入生物素标记抗体，经过温育与充分洗涤后，再加入HRP偶联的亲和素，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-生物素标记抗体-亲和素酶的夹心复合物。加TMB显色液，产生蓝色产物，在终止液作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的浓度。
特异性
本试剂盒识别天然和重组人尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)，与结构类似物无交叉。
典型数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。每次检测，每块酶标板都必须设立标准曲线。详情数据见说明书！
精密度
批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
详情数据见说明书！
回收率
分别往不同样本中添加已知的高、中、低浓度目的蛋白样品，进行五次在同一个板块内回收率评估，回收率在85%-115%之间。 详情数据见说明书！
试剂盒组成及保存
校准品：2 vial；保存：2-8℃
校准品复溶液：2 vial；保存：2-8℃
校准品&样本稀释液：25mL；保存：2-8℃
包被微孔板：96T/48T；保存：2-8℃
生物素抗体：10mL；保存：2-8℃
HRP标记亲和素：10mL；保存：2-8℃
TMB显色液：10mL；保存：2-8℃
终止液：6mL；保存：2-8℃
20×浓缩洗涤液：25mL；保存：2-8℃
说明书 1份
自封袋 1个
不干胶 4片
试验所需自备物品
1.标准规格酶标仪。
2.自动洗板机。
3.振荡器。
4.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。
操作步骤
所有试剂和组分都先恢复到室温，校准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置校准品孔、样本稀释液孔、空白孔和样本孔，校准品孔各加不同浓度的校准品50μL，样本稀释液孔加样本稀释液50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本50μL。除空白孔外，每孔加入生物素抗体100uL，用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育60min。
4、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
5、除空白孔外，每孔加入HRP标记亲和素100uL，用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育20min。
6、重复步骤4。
7、所有孔中加入TMB显色液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育15min。
8、所有孔加入终止液50μL，在450nm波长酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。
