用途
用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白IgG抗体(KLH-IgGAb)的浓度。
检验原理
本试剂盒采用间接两步法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白IgG抗体(KLH-IgGAb)（固相抗原）的微孔酶标板中，加入不同浓度校准品和待测样本，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，再加入（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中待测抗体的浓度呈正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本待测抗体的浓度。
特异性
本试剂盒识别天然和重组小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白IgG抗体(KLH-IgGAb)，与结构类似物无交叉。
典型数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。每次检测，每块酶标板都必须设立标准曲线。详情数据见说明书！
精密度
批内变异系数CV%小于10%；批间变异系数CV%小于15%。
线性
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。
试剂盒组成及保存
校准品：0.3ml/管*6管，保存：2-8℃
包被微孔板：96T，保存：2-8℃
HRP标记抗体：10mL，保存：2-8℃
底物液A：6mL，保存：2-8℃
底物液B：6mL，保存：2-8℃
样本稀释液：60mL，保存：2-8℃
终止液：6mL，保存：2-8℃
20×浓缩洗涤液：30mL，保存：2-8℃
说明书：1份，保存：2-8℃
自封袋：1个，保存：2-8℃
不干胶：2片，保存：2-8℃
试验所需自备物品
1.标准规格酶标仪。
2.自动洗板机。
3.振荡器。
4.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。
操作步骤
1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加，用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
6、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。
7、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
10、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪450nm波长下读取各孔吸光度（OD值）。
